土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性檢測試劑盒說明書

注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定。

貨號：DM-W-B900

規(guī)格：100T/96S

產品內容：

試劑一：液體 42mL×1 瓶，4℃避光保存。

微量法

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。試劑三：液體 2.5mL×1 瓶，4℃ 保存。

試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 576μL 無水乙醇（自備），24 μL 蒸餾水充分溶解。

（變褐色后不能再使用）

標準品：液體 1mL×1 支，0.5 μmol/mL 苯酚標準液，4℃保存。

產品說明：

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 顯著影響，根據最適 pH 范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

酸性環(huán)境中，S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測定酚的生成量即可計算出 S-ACP 活性。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

操作步驟：

一、粗酶液提?。?/span>

稱取風干混勻土壤約 0.1g，加入 0.05mL 甲苯（自備），輕搖 15min；加 0.4 mL 試劑一并且搖勻后，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱，開始計時，催化反應 24h；到時后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應。10000rpm 室溫離心 10min，取上清液置于冰上待測。

二、測定步驟：

a. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調零。

b. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10 μL 蒸餾水，20 μL 試劑三，4 μL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 166μL，混勻后室溫靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。

c. 標準管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10 μL 標準液，20 μL 試劑三，4 μL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 166μL，混勻后室溫靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 標準管。

d. 測定管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10 μL 上清液，20 μL 試劑三，4 μL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 166μL，混勻后室溫靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 測定管。

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 1 個酶活單位。

S-ACP（nmol/d/g）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總÷W÷T

=725×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W

C 標準液：0.5 μ mol/mL； V 總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣品質量，g；T：催化反應時間，24 h=1 d。