人整合素關(guān)聯(lián)蛋白(IAP) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

操作步驟

1. 準(zhǔn)備試劑
根據(jù)需要準(zhǔn)備適量的ELISA試劑盒，包括抗體、酶標(biāo)二抗、標(biāo)準(zhǔn)品等。
2. 制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液
將標(biāo)準(zhǔn)品按照說(shuō)明書(shū)上的要求進(jìn)行稀釋?zhuān)话悴捎帽侗认♂尫?，制備成不同濃度的?biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 加樣
將待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別加入對(duì)應(yīng)的微孔板中，按照說(shuō)明書(shū)上的加樣量加入相應(yīng)的體積。
4. 孵育
將微孔板密封后置于37℃孵育一定時(shí)間，一般為1-2小時(shí)。
5. 洗滌
洗滌是ELISA實(shí)驗(yàn)中非常重要的一步，需要按照說(shuō)明書(shū)上的要求進(jìn)行正確的洗滌操作。洗滌的目的是去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少非特異性干擾。
6. 加酶標(biāo)二抗
洗滌完成后，加入酶標(biāo)二抗，按照說(shuō)明書(shū)上的加樣量加入相應(yīng)的體積。然后再次將微孔板密封后置于37℃孵育一定時(shí)間。
7. 洗滌
同步驟5，進(jìn)行正確的洗滌操作。
8. 加底物溶液
洗滌完成后，加入底物溶液，按照說(shuō)明書(shū)上的加樣量加入相應(yīng)的體積。然后將其置于室溫下避光孵育一定時(shí)間。
9. 終止反應(yīng)
加入終止液，使反應(yīng)停止。一般采用硫酸作為終止液。
10. 檢測(cè)讀數(shù)
在酶標(biāo)儀上讀取各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度和光密度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)待測(cè)樣本的光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度。

試劑盒組成

結(jié)果計(jì)算

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

人整合素關(guān)聯(lián)蛋白(IAP) ELISA 試劑盒