人黑色素瘤凋亡抑制蛋白(BIRC7)ELISA試劑盒

原理

      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復(fù)凍融或長(zhǎng)時(shí)間保存于室溫。

2. 實(shí)驗(yàn)前確保所有試劑均已恢復(fù)至室溫。

3. 加樣時(shí)注意避免產(chǎn)生氣泡。

4. 洗滌時(shí)要保證充分洗滌，避免殘留物影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5. 底物溶液應(yīng)避光保存，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中。

6. 酶標(biāo)儀應(yīng)使用450nm波長(zhǎng)進(jìn)行讀數(shù)，其他波長(zhǎng)可能導(dǎo)致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn)和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。

試劑盒組成

人黑色素瘤凋亡抑制蛋白(BIRC7)ELISA試劑盒

操作步驟

1. 樣品收集與處理

（1）根據(jù)需要收集不同種類的樣品，如血清、血漿、尿液等。

（2）對(duì)于血清和血漿樣品，將采集的血液靜置一段時(shí)間后，離心分離出血清或血漿。

（3）對(duì)于尿液樣品，收集尿液后，可直接進(jìn)行檢測(cè)。

2. 樣品稀釋

  根據(jù)試劑盒說(shuō)明，對(duì)需要稀釋的樣品進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋。

3. 加樣

（1）按照試劑盒說(shuō)明，分別將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品加入相應(yīng)的孔中。

（2）每孔加入50μL，輕輕震蕩混勻。

4. 封閉

  根據(jù)試劑盒說(shuō)明，加入適量的封閉液，覆蓋板孔，并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液，可以降低非特異性結(jié)合的影響。

5. 洗滌

（1）將板孔洗滌液加入到每個(gè)孔中，輕輕震蕩，然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次，每次用洗滌液充分洗滌

（2）最后一次洗滌后，用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。

6. 酶標(biāo)二抗加入及孵育

（1）根據(jù)試劑盒說(shuō)明，將酶標(biāo)二抗加入相應(yīng)的孔中。

（2）孵育一定時(shí)間后，將板孔中的溶液倒掉。

7. 洗滌與顯色

（1）重復(fù)步驟5的洗滌過(guò)程。

（2）加入顯色劑，孵育一定時(shí)間后，將板孔中的溶液倒掉。

8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

（1）加入終止液，終止酶促反應(yīng)。

（2）用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值（OD值）。

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，利用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過(guò)計(jì)算得到待測(cè)樣品的濃度。

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