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簡(jiǎn)要描述:上海篤瑪生物科技有限公司長(zhǎng)期為高校及醫(yī)院等研究機(jī)構(gòu)提供各類(lèi)品質(zhì)過(guò)硬,價(jià)格實(shí)惠,售后完善的生化試劑,公司擁有完善的庫(kù)存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的利純化技術(shù),保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性,相關(guān)活動(dòng)信息可聯(lián)系客服。人胰脂肪酶(PL) ELISA 試劑盒
實(shí)驗(yàn)原理
1. 抗原抗體反應(yīng)
ELISA試劑盒中的抗原或抗體被固定在固相載體上,當(dāng)加入待測(cè)樣本時(shí),樣本中的抗原或抗體與固相載體上的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng),形成抗原抗體復(fù)合物。
2. 酶標(biāo)記物的結(jié)合
將酶標(biāo)記物與特異性抗體或抗原結(jié)合,形成酶標(biāo)記抗體或抗原。酶標(biāo)記物在反應(yīng)中起到催化作用,加速反應(yīng)進(jìn)程,提高檢測(cè)靈敏度。
3. 酶促反應(yīng)
在酶標(biāo)記物與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合后,加入底物溶液,底物在酶的催化下發(fā)生氧化還原反應(yīng),產(chǎn)生顏色變化。顏色深淺與待測(cè)樣本中的抗原或抗體濃度成正比。
4. 吸光度檢測(cè)
將反應(yīng)體系中的吸光度進(jìn)行測(cè)量,通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測(cè)樣本溶液的吸光度值,即可計(jì)算出待測(cè)樣本中的抗原或抗體濃度。
試劑盒組成
名稱(chēng) | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無(wú) |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無(wú) |
樣本xi釋液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
檢測(cè)抗體 | 10mL | 5mL | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
底物B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無(wú) |
說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 | 無(wú) |
自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無(wú) |
準(zhǔn)備工作
1.孔板室溫平衡1小時(shí)
2.做好布板圖譜
3.樣本解凍
4.準(zhǔn)備各型號(hào)的移液槍、槍頭、量筒
5.準(zhǔn)備雙蒸水
6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液
7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液
8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器
9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙
10.根據(jù)說(shuō)明書(shū)提示,溶解標(biāo)準(zhǔn)品
11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品
12.配制質(zhì)控品
13.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋樣本
14.準(zhǔn)備好封板膜
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 樣品收集與處理
(1)根據(jù)需要收集不同種類(lèi)的樣品,如血清、血漿、尿液等。
(2)對(duì)于血清和血漿樣品,將采集的血液靜置一段時(shí)間后,離心分離出血清或血漿。
(3)對(duì)于尿液樣品,收集尿液后,可直接進(jìn)行檢測(cè)。
2. 樣品稀釋
根據(jù)試劑盒說(shuō)明,對(duì)需要稀釋的樣品進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋。
3. 加樣
(1)按照試劑盒說(shuō)明,分別將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品加入相應(yīng)的孔中。
(2)每孔加入50μL,輕輕震蕩混勻。
4. 封閉
根據(jù)試劑盒說(shuō)明,加入適量的封閉液,覆蓋板孔,并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液,可以降低非特異性結(jié)合的影響。
5. 洗滌
(1)將板孔洗滌液加入到每個(gè)孔中,輕輕震蕩,然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次,每次用洗滌液充分洗滌
(2)最后一次洗滌后,用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。
6. 酶標(biāo)二抗加入及孵育
(1)根據(jù)試劑盒說(shuō)明,將酶標(biāo)二抗加入相應(yīng)的孔中。
(2)孵育一定時(shí)間后,將板孔中的溶液倒掉。
7. 洗滌與顯色
(1)重復(fù)步驟5的洗滌過(guò)程。
(2)加入顯色劑,孵育一定時(shí)間后,將板孔中的溶液倒掉。
8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)
(1)加入終止液,終止酶促反應(yīng)。
(2)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值(OD值)。
人胰脂肪酶(PL) ELISA 試劑盒
結(jié)果判斷
1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖,如設(shè)置復(fù)孔,則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 推薦使用專(zhuān)業(yè)的曲線制作軟件,如curve expert 1.3或1.4,在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,乘以稀釋倍數(shù);亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè),計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
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