實(shí)驗(yàn)原理

    1. 抗體或抗原的吸附：將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí)，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度，可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒組成

操作步驟 

1. 樣品采集與處理

（1）血清：收集血液后，室溫放置30分鐘左右，待血液凝固后離心分離血清。

（2）血漿：收集血液后，加入適量抗凝劑（如EDTA），離心分離血漿。

（3）細(xì)胞培養(yǎng)上清液：收集細(xì)胞培養(yǎng)液，離心去除細(xì)胞殘骸，收集上清液。

2. 樣品稀釋

根據(jù)需要，將血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

3. 加樣與溫育

（1）將稀釋后的樣品加入已包被兔生長(zhǎng)抑su抗體的酶標(biāo)板孔中，每孔加入100μL。

（2）加入適量酶標(biāo)二抗，每孔加入100μL。

（3）將酶標(biāo)板放入37℃恒溫箱中溫育30分鐘。

4. 洗板與顯色

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液洗3次，每次5分鐘。

（2）加入底物液，每孔加入100μL，放入37℃恒溫箱中溫育15分鐘。

（3）加入終止液，每孔加入50μL，混勻。

5. 測(cè)定與結(jié)果計(jì)算

（1）用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔的光密度值（OD值），波長(zhǎng)為450nm。

（2）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與OD值的對(duì)應(yīng)關(guān)系，計(jì)算出樣品中兔生長(zhǎng)抑su濃度。

人激肽釋放mei結(jié)合蛋白 ELISA 試劑盒

結(jié)果分析

1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專(zhuān)業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

注意事項(xiàng)

A 仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

B 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過(guò)有效期，請(qǐng)勿使用。

C 按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）。

D 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。

E 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，（比如移液器，試管，清洗器，酶標(biāo)儀）。

F 按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。

G 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)推薦的條件存儲(chǔ)。

H 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測(cè)稀釋液，可能在設(shè)計(jì)時(shí)就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標(biāo)板之，必需不停攪拌。

I 充分的孵育時(shí)間和溫度。

J 切勿使用不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。

K 在混合或溶解蛋白溶液時(shí)，避免泡沫產(chǎn)生。

L 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之，安排好實(shí)驗(yàn)流程。

M 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之，清潔工作臺(tái)。

N 若有問(wèn)題，應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系